DIN 10486:2017 pdf free.Milk and milk products—Determination of lactose content of lactose-reduced milk and milk products in the presence of glucose—Enzymatic method.
3 Begriffe
Für die Anwendung dieses Dokuments gilt der folgende Begriff.
3.1
Lactosegehalt
der nach dieser Norm bestimmte Gehalt an Lactose in g/100 g Probe, angegeben als ,,Lactose wasserfrei” oder als ,,a-Lactose-Monohydrat”
Anmerkung I zum Begriff: Der Gehalt an a-Lactose-Monohydrat wird durch Multiplikation des Gehaltes an wasserfreier Lactose mit dem Faktor 1,0526 erhalten.
4 Kurzbeschreibung
In dem von Felt und Eiwei1 befreiten, wässrigen Extrakt der Probe wird die vorhandene frei vorliegende Glucose durch das Enzym Glucose-Oxidase (GOD) und Wasserstoffperoxid zu Gluconsäure oxidiert. Anschliegend wird Lactose mit Hilfe des Enzyms 13-Galactosidase in die Monosaccharide Glucose und
Galactose gespalten. Glucose wird in Gegenwart des Enzyms Hexokinase (HK) durch Adenosin-5’-triphosphat (ATP) zu Glucose-6-phosphat (G-6-P) phosphoryliert, weiches anschlieL4end in Gegenwart des Enzyms Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (G6P-DH) durch Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat (NADP) zu Gluconat-6-phosphat oxidiert wird. Die Menge der bei dieser Reaktion gebildeten reduzierten Form des Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphats (NADPHJ wird durch Messung des Extinktionsanstiegs der Probelosung bel 340 nm bestimmt und ist der gesamten im Testansatz vorhandenen Glucose (aus Lactose stammende Glucose und restliche freie nicht oxidierte Glucose) proportional. In einem Parallelansatz wird die vorhandene restliche freie, nicht oxidierte Glucose ohne vorherige Spaltung der Lactose in gleicher Weise durch Phosphorylierung und Oxidation zu Gluconat-6-phosphat bestimmt. Die Differenzen der Extinktionen zwischen den Prüfansätzen mit und ohne 13-Galactosidase sind proportional der aus Lactose freigesetzten Glucose und somit auch dem Lactosegehalt der Probe.
5 Chemikalien
Soweit nicht anders angegeben, sind analysenreine Chemikalien zu verwenden. Das für die Probelosung verwendete Wasser muss mindestens die Reinheit von destilliertem Wasser haben. Zur Herstellung der Enzym- und Coenzymlosungen sowie der Pufferlosungen ist bidestilliertes Wasser zu verwenden.
8 Durchführung
8.1 Probenvorbereitung
Die Probe wird vor der Untersuchung gut durchrnischt, urn eine reprasentative Untersuchungsprobe zu erhalten.
8.2 Herstellung der Probelosung
Etwa 25 g Much werden in em 100-mi-Bechergias (6.10) auf ± 0,1 g eingewogen, mit etwa 25 ml destilliertern Wasser erganzt und aufeinem Magnetruhrer (6.5) für die anschliegende Carrez-Klarung geruhrt.
Bei der Untersuchung von Milchprodukten, wie z. B. Joghurt oder Quark, werden 15 g bis 20 g Probe eingewogen, mit etwa 30 ml auf 50 °C erwärmtem, destilliertem Wasser versetzt und 20 mm gerührt.
8.3 Klären der Probelösung (Protein-Entfernung)
Nacheinander werden unter Rühren zuerst 2 ml Kaliumhexacyanoferrat(II)-Losung (5.1) und dann 2 ml Zinksulfat-Losung (5.2) hinzugefügt. AnschlieL4end wird der pH-Wert mit Natronlauge (5.5) auf pH 7,0 bis 7,5 eingestellt (pH-Meter), die Probe in einen 100-ml-Messkolben (6.3) überfUhrt und mit destilliertem Wasser bis zur Marke aufgefUllt. Nach grundlichem Mischen wird die Losung durch em Faltenfilter (6.7) filtriert.DIN 10486 pdf download.